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临床执业医师考试生物化学指导:基因工程基本原理

2017-11-20 17:06:21 来源:网络新东方在线临床执业医师辅导班
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  基因工程基本原理:一个完整的基因克隆过程应包括:目的基因的获取,克隆基因载体的选择与改造,目的基因与载体的连接,重组DNA分子导入受体细胞,筛选出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞。实现上述过程需要一些重要的工具酶,如限制性内切核酸酶连接酶等。限制性内切核酸酶是一类识别DNA特意序列的内切核酸酶。

  ①目的基因的获取:

  外源基因又称目的基因,来源于几种途径:化学合成、酶促合成cDNA,制备的基因组DNA及PCR技术。细菌质粒、噬菌体和一些病毒DNA均可被改造成基因克隆的载体。

  ②基因载体的选择与构建:

  可作为基因载体的DNA分子有质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA,它们经适当改造后仍具有自我复制能力,或兼有表达外源基因的能力。

  ③外源基因与载体的连接:

  连接方式有:黏性末端连接、平端连接和人工接头连接等。

  ④重组DNA导入宿主细胞:

  外源DNA与载体在体外连接成重组DNA分子,需将其导入宿主细胞。随受体细胞生长、增殖,重组DNA分子得以复制、扩增。

  ⑤重组体的筛选:

  鉴定哪一菌落或嗜菌斑所含重组DNA分子确实带有目的基因,即可得到目的基因的克隆,这一过程即为筛选或选择。

  ⑥克隆基因的表达:

  在原核或真核表达体系中进行表达,获得所需要的蛋白质。

  例题(单选):在分子生物学领域中,分子克隆主要是指:

  A.DNA的大量复制

  B.DNA的大量剪切

  C.RNA的大量复制

  D.RNA的大量剪切

  E.反转录酶

       以上是临床执业医师考试辅导资料,祝大家考试顺利! 


责任编辑:daijiangming

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7证书领取两年内

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